400-820-8531
2024年12月，南京医科大学李晶等团队在Journal of Extracellular Vesicles（IF=15.5）上发表了“Distinct molecular properties and functions of small EV subpopulations isolated from human umbilical cord MSCs using tangential flow filtration combined with size exclusion chromatography”的研究论文。该论文提供了一种切向流过滤（TFF）结合尺寸排阻色谱（SEC）的方法来大规模分离和纯化源自人脐带间充质干细胞（HucMSCs）的sEVs亚群。S1-sEVs和S2-sEVs在大小、膜标记蛋白和携带物方面表现出稳定的变化，通过体外实验和动物疾病模型，研究人员验证了S1-sEVs和S2-sEVs的不同功能。S1-sEVs表现出更强的免疫调节作用，而S2-sEVs则在促进细胞增殖和血管生成方面表现出更强的能力。这种方法为针对不同MSCs适应症的靶向治疗干预提供了可能。拜谱生物工程为该研究提供了蛋清组学拜谱生物。
英文版文章标题：Distinct molecular properties and functions of small EV subpopulations isolated from human umbilical cord MSCs using tangential flow filtration combined with size exclusion chromatography
发表文章学术期刊：Journal of Extracellular Vesicles
危害成分：15.5
刊出時间：2024.12.7
做者企业：南京医科大学
组学工艺：miRNA测序、血清组学（拜谱生物体带来了）
调查的原材料：外泌体
科学研究路经：
一、的研究但是
01、能够 将TFF与SEC平台相构建来分离法sEVs亚群和HucMSCs
从而体现比较适合临床研究应该用的MSC-sEVs的大投资规模加工，原我们分为好几回种将TFF与SEC相依照的方法步骤，从HucMSCs的因素培养计划基中离和纯化sEVs。根据血清质印痕、NTA数据分析、纳流上皮细胞术的没想到得出结论脱离的好几个峰可能会代表会了sEVs的好几个差异亚群。原我们将相对应的于这好几个谷值的sEVs亚群分辨创建为S1-sEVs和S2-sEVs（图1）。
图1：TFF搭配SEC机系统从HucMSCs中分发型离和定性分析sEVs亚群
02、MSC-sEVs亚群的定性分析
sEVs标志物的差异表达意味着它们可能具有不同的内容或功能。为了表征MSC-sEVs亚群的异质性，首先使用血清组学分析。总共在S1和S2-sEVs亚群中分别鉴定出1326和1246个蛋白质，其中447个蛋白质在S1-sEVs中高度表达，127个蛋白质在S2-sEVs中富集（图2a）。KEGG分析表明，蛋白酶体途径是S1-sEVs富集蛋白中最富集的通路，而代谢途径在S2-sEVs中显示出最高水平的富集（图2b）。除此之外，还发现S1-sEVs中生长因子受体的富集，例如表皮生长因子受体（EGFR）、肝细胞生长因子受体（HGFR）、成纤维细胞生长因子受体1（FGFR1）等。然而，在S2-sEVs中，枢纽蛋白与代谢、糖酵解和缺氧诱导因子1（HIF-1）信号通路密切相关（图2c-h）。这说明了S1-sEVs和S2-sEVs在靶细胞活动的调节中可能具有不同的作用。
图2：俩个sEVs亚群的球蛋白组学概述
为了探索sEVs亚群中的其他分子，作者进行了miRNA测序，并在S1-sEVs和S2-sEVs中分别鉴定了173和79个miRNA两个sEVs亚群之间的差异表达miRNA，其中在S1-sEVs中发现了113个独特的miRNA，而在S2-sEVs中仅发现了19个miRNA（图3a-b）。通过qRT-PCR验证了在S1-sEVs或S2-sEVs中富集的代表性miRNA，包括let-7b-5p、miR-155-5p、let-7c-5p、miR-9-5p和miR-30d-5p（图3c-g）。在S1-sEVs中，核心节点靶基因包括酪氨酸3-单加氧酶/色氨酸5-单加氧酶激活蛋白zeta（YWHAZ）、BTB结构域和CNC同源物1（BACH1）、丛蛋白D1（PLXND1）、高迁移率组AT-hook1（HMGA1）、SMAD家族成员2（SMAD2）、IL6、IL6R 和转化生长因子β受体1（TGFBR1).在S2-sEVs中，核心节点靶基因被鉴定为PR/SET结构域1（PRDM1）、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A（CDKN1A）、原纤维蛋白2（FBN2）、Notch受体1（NOTCH1）、KLF转录因子6（KLF6）和贝克蛋白1（BECN1）。GO分析显示S1-sEVs组靶基因中与细胞内蛋白质转运、染色质或组蛋白修饰相关的丰富生物过程，而S2-sEVs组靶基因中富含细胞增殖或代谢相关生物过程的负调控（图3h-j）。KEGG通路分析，发现S1-sEVs的miRNAs靶基因在与RNA转运或贴壁连接等相关的信号通路中更富集，而S2-sEVs中的miRNAs靶基因在丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）和Wingless/Integrated（WNT）信号通路中更富集（图3k）。
图3：3个sEVs亚群的miRNA谱
03、S1-sEVs和S2-sEVs对生殖癌细胞分裂繁殖和巨噬生殖癌细胞极化的不一致性调节作用
特征提取两人sEVs亚群的有所地域差异带上物形成，调查进一点分用两种有所地域差异用量的S1-sEVs或S2-sEVs的培养3T3组织生殖血内部还有用脂多糖（LPS）操作小鼠骨髓来源于的巨噬组织生殖血内部（BMDMs）。结论发现S1-sEVs和S2-sEVs对组织生殖血内部产生和裂变浓度的表现出有所地域差异的应响，或者对巨噬组织生殖血内部极化的实力发生地域差异（图4a-p）。
图4：S1-sEVs和S2-sEVs对内部繁殖和巨噬内部极化的相互影响政策调控
04、S1-sEVs和S2-sEVs后面肢梗死中的差异性调试
MSC名词解释双重性的sEVs完成加快新血栓壁的造成前边肢血栓痉挛手术治疗中被多新闻稿，要为看S1-sEVs和S2-sEVs对血栓壁转成和血栓痉挛组织安排回收利用的反应，完成单边股主动脉结扎制定了小鼠后肢血栓痉挛建模。毕竟阐明与S1-sEVs相对于，S2-sEVs特征出优异的促血栓壁转成特征，产生血栓痉挛介导直接损伤后后肢快速的全牙齿修复和回收利用（图5a-o）。
图5：S1-sEVs和S2-sEVs对后肢脑供血不足的各个进行治疗的效果
05、S1-sEVs和S2-sEVs在肤质伤口发炎痊愈中的能力
MSC简答并衍生的sEV及其在整形、受损、烧伤或高血压传染性疾病产生的肌肤好特效患处结痂消退中的功效而被广学习。是为了确认观察分开的sEVs亚群对肌肤好特效患处结痂消退的后果，本学习搭建一个多个具深部2度烧伤的大鼠模型工具。的结果表达S2-sEVs确认对糖酵解的积极进取后果对肌肤好特效患处结痂消退表演出极其对身体有利的后果（图6a-p）。
图6：S1-sEVs和S2-sEVs对皮夫伤口发炎消退的有差异 关系
06、S1-sEVs和S2-sEVs对DSS诱惑的乙状结肠炎的不一样的治疗实际效果
写作者出现 S1-sEVs和S2-sEVs对巨噬细胞膜正负极的差别调结后面，马上在小鼠乙状乙状结肠炎建模方法中监测患者的免疫抗体调结的功能。結果体现了S1-sEVs手术治疗DSS介导的乙状乙状结肠炎的炎症因子朋友（图7a-s）。
图7：S1-sEVs和S2-sEVs对造成 伤口发炎结疤的不相同影晌
07、sEVs俩个亚群中生态学产生的的差异监测
ESCRT信任性路线和非ESCRT性路线都专业指导sEV的生态学进行。在一项调查中，小说拜谱生物得知了sEVs图标物在S1-sEVs和S2-sEVs中的差距把你想表达出来。EGFR是经典的内吞路线中已组建的HGS底物，无论怎样在S1-sEVs和S2-sEVs过程都能能观察分析到EGF蛋白质，但在S1-sEVs中EGFR泛素化级别要高得多，HGS在将泛素化物品教育引导到S1-sEVs中起重中之重帮助，使用营造HGS敲除细胞核系得知HGS的丢失帮助S1-sEVs的生态学进行看起来下降，但对S2-sEVs的生成近乎不能影晌，是因为S1-sEVs和S2-sEVs使用不一的控制机制化排出，区分又称ESCRT信任性和ESCRT非信任性路线（图8a-t）。
图8：sEVs的两根亚群间生物制品发生的文化差异调低
二、论文工作小结
本研究使用TFF和SEC从人MSC中分离的两个sEV亚群在大小、膜标志物或携带物上表现出差异，并探究不同的sEVs亚群代表了MSCs的不同生物学功能。利用蛋白酶组学，miRNA测序及基因敲除，模型构建等分子生物学实验表明了高度表达CD9、HRS和GPC1的S1-sEVs表现出更大的免疫调节作用，而富含CD63和FLOT1/2表达的S2-sEVs在促进细胞增殖和血管生成方面具有增强的能力。这些差异归因于它们包含的特定蛋白质和miRNA。进一步研究显示，两个不同的sEVs亚群对应于不同的生物过程：ESCRT通路（S1-sEVs）和以脂质筏（S2-sEVs）为代表的ESCRT非依赖性通路（图9）。这种方法可能为各种MSC适应症的靶向治疗干预提供优势。
图9：sEVs亚群的生物制品合成视频信任于差异的人体细胞内经由
三、拜谱总结ppt
该研究使用TFF-SEC系统从人脐带间充质干细胞中规模化生产不同的sEVs亚群，并且鉴定和表征了两种不同的sEVs亚群，S1-sEVs和S2-sEVs，它们在生物发生、特征和携带物含量方面有所不同。这些差异导致了它们生物学功能的变化。虽然MSC衍生的SEV因其临床潜力而备受关注，但该研究引入了一个新概念，即利用这些不同的MSC sEVs亚群对特定疾病进行靶向治疗。拜谱生物为该研究提供了蛋清组学检测分析服务，拜谱生物可提供完善成熟的转录组学、蛋白组学、代谢组学以及多组学联合产品技术服务体系，助力发表高分文献，欢迎致电咨询！
分类论文文献：
LiuW, Wang X, Chen Y, Yuan J, Zhang H, Jin X, Jiang Y, Cao J, Wang Z, Yang S, Wang B, Wu T, Li J. Distinct molecular properties and functions of small EV subpopulations isolated from human umbilical cord MSCs using tangential flow filtration combined with size exclusion chromatography. J Extracell Vesicles. 2025 Jan;14(1):e70029. doi: 10.1002/jev2.70029. PMID: 39783889; PMCID: PMC11714183
目光消费者号
喜爱点点书
