肉的宰后嫩化大部分归因于肌原玻纤构造的危害，肌原玻纤构造是由内源性蛋清质酶质酶油脂球脂肪酸水解酶吸附肌原玻纤和神经元膜骨架蛋清质酶质酶发生的。与十几年来一直都在是私信亮点的钙蛋清质酶质酶酶不一，胱天蛋清质酶质酶酶（caspases）近日拥有感需求话语题。胱天蛋清质酶质酶酶在神经元膜凋亡的实行阶段中起着至关为重要的意义，进来caspase-3在去世蛋清质酶质酶油脂球脂肪酸水解中的意义是各个面和多样化的，往往什么值得进两步深入分析研究。S-亚硝基化根据转换钙发出、精力新陈代谢、蛋清质酶质酶质吸附和神经元膜凋亡来转换吃起来，收录嫩度和持水的能力。先前深入分析研究表明S-亚硝基化不错降低依赖性线粒体的caspase-3级联不良反应，这机会是手臂肌肉神经元膜凋亡和羊肉好品质變化的缘由。caspase-3的深入分析研究省级重点是其与神经元膜凋亡的关联，同时，通常很少有深入分析研究研究S-亚硝基化转换caspase-3的工作机制。

2024年9月由沈阳农牧业高中张万刚传授微商团队在期刊Journal of Agricultural and Food Chemistry发表题为“Exploring the Effects of S‑Nitrosylation on Caspase‑3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro”文章，研究发现了GSNO处理后caspase-3的活性显著降低（P < 0.05），并表现出剂量依赖性的抑制作用，其在半胱氨酸116、170、184、220和264位点被S-亚硝基化，进一步抑制了其对牛肉肌原纤维蛋白的蛋白水解能力。拜谱生物制品为该研究提供了亚硝基化掩盖组学拜谱生物，助力发现目的蛋白上的亚硝基化修饰位点。

英文版宝贝标题：体外研究S-亚硝基化对牛肉Caspase-3修饰和肌原纤维降解的影响

杂志期刊：Journal of Agricultural and Food Chemistry

2023年会影响要素：5.7

文章发表日子：2024年9月

玩家标准：南京农业大学

探索相关材料：蛋白

拜谱带来方法：亚硝基化修饰组学

技术设备自驾线路：

一、研究探讨导致

01.Caspase-3化学活化

现今尚不模糊不清NO对caspase-3的减弱功效可否归因于NO介导的S-亚硝基化，的不同含量均值的GSNO最为外源性NO生产，以诱惑caspase-3的身体S-亚硝基化。最终意味着，与不存在GSNO的组比较，100、200和400μM GSNO组的caspase-3催化化学活化为显著大幅度减低（图1），与已经报到一样。GSNO处里大幅度减低caspase-3催化化学活化的风险的原因仍仍待说明。

图1 不一氧浓度的GSNO工作对caspase-3抗逆性的决定

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

02.Caspase-3的S-亚硝基化能力

科学实验Caspase-3的亚硝基化因素，以阐发GSNO对Caspase-3的的反应性。经GSNO进行处理后，判断到caspase-3球蛋白S-亚硝基化硬度加大（图2）。某些結果表示，外源性GSNO的培养可成功的 成脂caspase-3的体内S-亚硝基化。使人目瞪口呆的是，在如果没有GSNO留存的比对组中判断到一款 很弱的S-亚硝基化带，这表示caspase-3将会发现内源性的S-亚硝基化。另外，本科学实验中caspase-3的S-亚硝基化因素较高，而caspase-3的活性酶类下降，这与事先的科学实验不一样。或许，caspase-3的特情人S-亚硝基化呈现位点尚不模糊不清，还须要进第一步的探求。

图2 GSNO办理对caspase-3S-亚硝基化平均水平的干扰

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

03.Caspase-3的S-亚硝基化位点

通过亚硝基化体现组学检测caspase-3的S-亚硝基化位点。结果表明，caspase-3上的4个多肽中有5个半胱氨酸残基被蛋白S-亚硝基化修饰（图3）。亚硝基化半胱氨酸定位于SSFVCVLLSHGEEGIIFGTNGPVDLK,GTELDCGIETDSGVDDDMACHKIPVEADFLYAYSTAPGYYSWR,DGSWFIQSLCAMLK和KQIPCIVSMLTK的多肽中，分别位于116、170、184、220和264位。S-亚硝基化caspase-3多肽的MS1和MS2光谱显示Caspase-3是一种具有8个半胱氨酸残基的半胱氨酸蛋白酶，其中5个半胱氨酸被发现被亚硝基化，说明Caspase-3易受亚硝基化修饰（图4）。此外，据先前报道casase-3的催化残留亚硝基化Cys163，这不同于本研究的结果。S-亚硝基化caspase-3的丰度、位点的修饰水平和检测方法的灵敏度的差异可能是导致结果不一致的原因之一。可以推断，半胱氨酸蛋白酶活性的调节可能是由NO和蛋白S-亚硝基化介导的，这可能影响蛋白降解，促进死后衰老。

图 3 caspase-3的字段。天蓝色记号的字段写出S-亚硝基化肽，黑色记号的C写出S-亚硝基化半胱氨酸

(图源：Hou, Qin et al., JAgric Food Chem.. 2024)

图4. s-亚硝基化肽和caspase-3位点的MS1和MS2光谱图

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

04.S-亚硝基化Caspase-3挥发结蛋白质

结核血清是另一种为比较重要的受损细胞核骨架核血清，在稳定肌受损细胞核的设计的的设计完善性和缩小性各方面起着为比较重要用处，理论研究S-亚硝基化caspase-3对结核血清溶解的特别敏感度的极具为比较重要寓意。与Std（未用胱天核血清酶-3和GSNO孵育的初始状态肌弹性化学纤维核血清）组相比较，0 μM GSNO组（肌原弹性化学纤维和caspase-3的孵育，无GSNO）的完善结核血清占比为显著降低了，提示卡caspase-3对结核血清极具潜在性的的核血清油脂水解作用。在GSNO孵育后，完善结核血清的占比严重加大（P < 0.05）。因此，当GSNO溶液浓度增大时，完善结核血清的占比快速调整（P < 0.05）（图5）。此种察觉到发现，SNO体现的caspase-3以含量信任的途径限制结核血清的溶解。

图5.S-亚硝基化caspase-3降解塑料结蛋白质

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

05.S-亚硝基化Caspase- 3光降解肌钙淀粉酶-T

肌钙蛋清-T (TnT)是原肌球蛋清调理否则肌肤收縮的丝条的必不可少肌原食物棉人造纤维蛋清。TnT的挥发强势特点是探测到28和30 kDa的TnT。在亚硝基化前提条件下，caspase-3对TnT的挥发情形如图已知6已知，与Std组（没含caspase-3和GSNO的肌原食物棉人造纤维）比较，caspase-3组中30 kDa TnT精彩细节描写强势增高，表述caspase-3参与性了TnT的挥发，除此以外，caspase-3与GSNO的孵育造成的30 kDa TnT变低。在100和200 μM GSNO组相互间不存在探测到很明显的不同之处(P > 0.05)，而当GSNO的酸度达标400 μM 时，该精彩细节描写强势减掉(P < 0.05)。许多看见表述了SNO体现的caspase-3对TnT挥发的限制做用。结蛋清和TnT是caspase-3的敏锐底物，而GSNO整理减小caspase-3的亲水性可能会造成的肌原食物棉人造纤维蛋清挥发方面减小。上面所说，NO介导的S-亚硝基化可能可以通过体现半胱氨酸残基来调理caspase-3的亲水性，行而进那步影晌其对结蛋清和TnT的蛋清蛋白质水解力，若想影晌牛肉片品格。

图6. S-亚硝基化caspase- 3化学降解肌钙淀粉酶-T

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

二、个人心得体会

本探索目的探析S-亚硝基化对caspase-3表达的危害十分最后对羊肉肌原化学纤维板体内光降解的危害。淀粉酶酶S-亚硝基化就能够表达caspase-3的半胱氨酸残基，而造成的caspase-3生物下降，进一次可以抑制了其对羊肉肌原化学纤维板淀粉酶酶的淀粉酶酶蛋白质水解程度。

三、拜谱个人总结

深入设计分析进行了酶活法测定，亚硝基化表达组学设计分析，WB等测量措施，看到淀粉酶酶S-亚硝基化不错表达caspase-3的半胱氨酸残基，这造成的了caspase-3亲水性的减轻，相结步克制了其对牛肉片肌原纤维板淀粉酶酶的淀粉酶酶淀粉水解业务能力。本深入设计分析为讲解淀粉酶酶质亚硝基化对吃起来的宏观调控机理保证新一个新的视觉。

拜谱生物作为一家国内领先的多组学服务公司，可提供完善成熟的营养素质组学、装饰营养素质组学、代谢转化组学、转录组学等多组学产品技术服务体系，整合多组学数据进行深入挖掘分析，全面解析机制机理等，助力高分文章发表。除此之外，拜谱生物还可提供半胱氨酸系列拜谱生物產品，包括亚硝基化、谷胱甘肽化、硫巯基化、次磺酸性反应、total防氧化重现、分散巯基，欢迎大家咨询！

学习文献综述：

Qin Hou, Chao Ma, Rui Liu, Zhuangli Kang, and Wangang Zhang.Exploring the Effects of S-Nitrosylation on Caspase-3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro. Journal of Agricultural and Food Chemistry. doi.org/10.1021/acs.jafc.4c06663